96 테스트 가나마이신 검출을 위한 ELISA 테스트 키트

카나마이신 ELISA 테스트 키트

제품 설명

레건^TM카나마이신 ELISA 테스트 키트는 고기/간/신장, 세포 리사트, 소변, 혈청 및 우유에서 카나마이신의 정량 분석을 위한 경쟁력 있는 효소 면역 검사입니다.

이 키트의 독특한 특징은 다음과 같습니다.

• 고 회수 (> 80%), 빠른 (10-40 분), 비용 효율적인 추출 방법.

• 검출 제한은 0.2 ng/g입니다.

• 높은 재생 가능성

• 빠른 ELISA 분석 (시각의 수와 상관없이 1시간 미만)

절차 개요

이 방법은 경쟁적인 컬러 미트릭 ELISA 분석을 기반으로 합니다. 카나마이신-BSA는 판 우물 안에 코팅되었습니다. 분석 중에,샘플과 카나마이신 항체 (항체 #1) 및 HRP-연합 항체 (HRP-연합 항체 #2) 가 잠복을 위해 우물에 추가됩니다.만약 가나마이신 잔해가 샘플에 존재한다면, 그것은 가나마이신 항체를 위해 판 구멍에 있는 가나마이신과 경쟁할 것입니다.접시에 덮여있는 약물에 복합된 주요 항체를 목표로합니다.HRP 기판 (TMB) 을 추가 한 후 발생하는 색상 강도는 표본의 가나마이신 잔류 농도와 역관계를 가지고 있습니다.

킷 내용, 보관 및 유효 기간

레건^TM카나마이신 ELISA 테스트 키트는 96개의 결정 또는 42개의 샘플을 두 배로 검사할 수 있습니다. (표준을 위해 12개의 우물을 가정합니다.)사용되지 않은 미크로 웰을 포일 봉지에 넣고 원래 패키지에 제공된 건조제로 다시 봉인합니다.* 키트를 2- 8°C에서 보관하십시오.

1 개월 이상 키트를 사용하지 않을 경우 - 20°C 또는 냉장고에서 카나마이신 표준 주식, 카나마이신 항체 #1 및 HRP 결합 항체 #2를 보관하십시오.

감수성 (탐지 한계)

특수성 (교차 반응성)

필요한 재료는 키트와 함께 제공되지 않습니다

• 미크로티터 판 판독기 (450nm)

• 튜브 믹서 (예를 들어, 옴니 튜브 마스터 호모게니저)

• 포르텍스 믹서 (예를 들어, VWR의 지니 포르텍스 믹서)

• 10, 20, 100 및 1000L 피펫

• 다채널 파이펫: 50~300 IU (선택)

경고 와 예방 조치

• 표준에는 카나마이신이 들어있어요
• 유효기간이 지나면 사용하지 마십시오.
• 유효기간 내에 동일한 부품 번호가 있는 성분을 제외하고는 서로 다른 키트 또는 롯의 반응제를 섞지 마십시오. 항체와 판은 키트 및 롯 특이입니다.
• 실험실 온도는 20°~25°C (68°~77°F) 를 유지하도록 노력하십시오. 이는 과도한 냉각, 난방 및/또는 증발을 유발할 수 있으므로 공기 통출장소 아래 또는 근처에서 테스트를 실행하지 마십시오. 또한,직접 햇빛 아래에서 테스트를 실행하지 마십시오.이것은 과도한 열과 증발을 일으킬 수 있기 때문입니다.추운 벤치 윗부분은 잠복 중에 표본 타울 또는 다른 고충 물질의 여러 층을 시험판 아래에 배치함으로써 피해야 합니다..
• 물의 질이 매우 중요하기 때문에 증류 된 물 또는 비이온화 된 물만을 사용하는지 확인하십시오.
• 표본이나 반응제를 빈 미크로티터 판에 삐펫으로 넣을 때, 삐펫 끝을 우물 아래쪽 구석에 배치하여 플라스틱과 접촉합니다.
• 검사판의 잠복 시기는 가능한 한 정확해야합니다. 검사판에 표준을 추가 할 때 일관성있게하십시오. 먼저 표준을 추가하고 샘플을 추가하십시오.
• 표준 곡선을 손상시킬 위험을 최소화 할 수 있으므로 낮은 농도에서 높은 농도로 순서대로 판에 표준을 추가하십시오.
• 항상 안정성 을 유지 하기 위해 접시 를 밀폐 된 봉지 에서 건조제 로 냉장 보관 합니다.접시에 있는 동안 방온 (20°C / 68°F) 에 평형되도록 함으로써 접시에 응고가 형성되는 것을 방지합니다..

표본이 적절하게 보관되어 있는지 확인하십시오. 일반적으로 표본은 2-4°C에서 1-2일 이상 냉장 보관해야 합니다.냉동 샘플은 방 온도 (20°C / 68°F) 에서 또는 냉장고에서 사용 하기 전에 녹일 수 있습니다..

• 1 × 샘플 희석물의 준비:10 × 샘플 희석물 1 볼륨을 9 볼륨의 증류 물과 섞는다.
• 준비 1 ×샘플 엑스트 버퍼: 10 × 샘플 엑스트. 버퍼의 1 볼륨을 9 볼륨의 증류 물과 혼합합니다.

세포 리사트

• 100 IU의 세포 리세이트를 받아, 900 IU의 1 × 샘플 희석 버퍼를 첨가하고, 잘 섞습니다.

• 4000 xg에서 5분 동안 원심분리합니다.

• 분자 하나당 50 IU의 수퍼나텐트를 채취합니다.

참고: 희석 요인: 10

새우/어류/고기/간이/신장

• 균일화된 샘플의 1.0g에 1×Sample Ext. 버퍼의 4.0mL를 추가합니다.

• 1분 동안 분자 믹서로 샘플을 분기합니다.

• 표본을 4천 xg에서 5분 동안 원심분해한다.

• 조심스럽게 새로운 튜브에 상단 층의 200uL를 옮기십시오.,1을 더합니다.375mL의 1X 샘플 희석물 및 25uL의 샘플 균형 버퍼, 30초 동안 회전.

• 분자당 50uL을 검사용으로 사용합니다.

참고:: 희석 요인: 40.

소변/세럽

• 소변 또는 혈청 샘플의 50uL를 가져와 1X 샘플 희석액의 1.2 ml를 첨가하고 잘 섞습니다.

• 4천 xg에서 5분 동안 원심분리합니다.

• 시험용 수포당 50uL의 수퍼나텐트를 채취합니다.

참고: 희석률 25

우유

• 100uL의 우유 샘플을 원심 분기 튜브에 넣고 900uL의 1X 샘플 희석물을 넣습니다.
• 30초 동안 활발하게 소용돌이
• 10분 동안 4000 xg에서 원심분기
• 50uL의 초상수 표본을 검사용으로 사용한다.

참고: 희석 요인:10

카나마이신 ELISA 테스트 키트 프로토콜

반응기 준비

중요: 모든 반응제는 사용 전에 실내 온도에 도달해야합니다. 1~2시간20 25°C / 68 77°F) 부문 "주의와 주의 사항"을 읽어 보시기 바랍니다.페이지3.용액은 ELISA 테스트 직전에 준비해야합니다. 모든 반응제는 사용 전에 부드럽게 뒤집거나 회전하여 혼합해야합니다. 실행되는 우물 수에 필요한 부피를 준비하십시오.반응 물질을 원본 저장 튜브/병에 반환하지 마십시오.반응 물질을 처리 할 때 일회용 용기를 사용하는 것은 오염 위험을 최소화 할 수 있으며 권장됩니다.

• 1X 세탁 용액의 준비

20X 세척 용액의 1 볼륨을 19 볼륨의 증류 물과 섞습니다.

ELISA 테스트 프로토콜

사용될 각각의 스트립과 알리쿼트 반응 물질을 다음과 같은 예로 표시합니다.

• 각 카나마이신 스탠더드 50 IU를 두 배로 다른 우물으로 넣는다 (스탠더드를 낮은 농도에서 높은 농도에 이르기까지 순서대로 판에 넣는다).

• 각 샘플의 50 IU를 두 배로 다른 샘플 웰에 넣는다.

• 각 우물에 HRP-Conjugated Ab#2의 50 IU와 각 우물에 Kanamycin Antibody #1의 50 IU를 첨가합니다. 30 분 동안 접시를 수동으로 부드럽게 흔들면서 잘 섞어주세요.

• 방온에서 30분 동안 접시를 부화시키십시오 (20°C / 68°F). (잠복 중에 직접 햇빛과 차가운 벤치 윗부분을 피하십시오. 잠복 중에 마이크로 티터 플레이트를 덮는 것이 좋습니다.)

• 1X 세척 용액의 250 IU로 접시를 4 번 씻으십시오. 마지막 세척 후 접시를 뒤집고 종이 수건에 부드럽게 접시를 건조하십시오. ( 접시 세척 직후 다음 단계를 수행하십시오.작업 단계 사이에 판을 공기 건조 허용하지 마십시오).

• 100 IU TMB 기판을 첨가합니다. 기판을 첨가 한 직후 반응 시간을 측정하십시오. 접시를 30 분 동안 수동으로 부드럽게 흔들면서 용액을 섞으십시오.잠재적인 오염을 피하기 위해 기판을 원래 용기에 다시 넣지 마십시오. 염색을 보이는 기판 용액은 악화의 징후이며 폐기해야합니다.잠복하는 동안 마이크로 티터 플레이트를 덮는 것이 좋습니다.).

• 방온에서 15분 동안 융복합한 후 (20 25°C / 68 77°F), 100 IU의 스톱 버퍼를 첨가하여 효소 반응을 중지합니다.

• 450nm 파장의 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판 판기판의 바닥에 빗이 없는 지팡이를 사용하여 습기와 지문으로 인해 측정이 방해되지 않도록).

카나마이신 농도 계산

표준 곡선은 각 참조 표준에서 얻은 평균 상대 흡수율 (%) 을 로그아리듬 곡선에서 ng/mL의 농도에 대하여 그래프화하여 구성 할 수 있습니다.

상대적 흡수율 (%) =흡수율 0 표준또는 샘플 x 100

표준 곡선에서 ng/mL로 시험된 약물의 대응 농도를 결정하기 위해 각 샘플의 평균 상대 흡수량 값을 사용한다.

다음 그림은 전형적인 클로람페니콜 표준 곡선입니다.